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用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法

更新時(shí)間:2012-06-04  |  點(diǎn)擊率:2924

 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:

1. 包被:用0.05M pH9.5碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含
量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,
4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分
鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,
置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)
性對(duì)照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的
稀釋度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液
0.1ml,37℃孵育10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏
色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色
的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)
儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)
零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為
陽(yáng)性。

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